Descripción general
La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) es probablemente la técnica analítica más común utilizada para separar y caracterizar proteínas. Los geles de poliacrilamida son geles químicamente reticulados formados por la reacción de acrilamida con un agente reticulante bifuncional como N,N′-metilenbisacrilamida (Bis). La composición del gel viene dada por %T, la concentración total (p/v) de acrilamida más reticulante, y %C, el porcentaje (p/p) de reticulante incluido en %T.
El "tamaño de poro" está determinado por la proporción de acrilamida a bisacrilamida y por la concentración de acrilamida. Una alta proporción de bisacrilamida a acrilamida y una alta concentración de acrilamida provocan una baja movilidad electroforética. La polimerización de los monómeros de acrilamida y bisacrilamida es inducida por persulfato de amonio (APS), que se descompone espontáneamente para formar radicales libres. Generalmente se incluye TEMED, un estabilizador de radicales libres, para promover la polimerización.
La solución de acrilamida/bisacrilamida de alta pureza y lista para usar (30 %, 37,5:1) se prepara a partir de acrilamida y bisacrilamida de grado electroforesis en agua ultrapura. El producto se pasa a través de un filtro de 0,2 µm. Esta solución de acrilamida/bisacrilamida
lista para usar contiene 29,22 % (p/v) de acrilamida y 0,78 % (p/v) de bisacrilamida para una proporción de monómero a reticulante de 37,5:1 (2,6 % de reticulante).