El juego Thermo Scientific CloneJET PCR Cloning Kit, también disponible con células DH10B (K123120), es un sistema de selección positiva avanzado para la clonación de alta eficiencia de productos de PCR generados con cualquier ADN polimerasa termoestable. Se puede clonar cualquier fragmento de ADN con extremos cohesivos o romos. Es ideal para fragmentos de ADN fosforilados o no fosforilados. La ligadura al vector de selección positiva incluido solo tarda unos 5 minutos y produce más del 99 % de clones recombinantes. Los productos de PCR de extremo romo generados con una enzima de corrección se ligan directamente en el vector de clonación.

Los productos de PCR generados con ADN polimerasas no de corrección o con mezclas de ADN polimerasas se despuntan antes de la ligadura en 5 minutos con la enzima de conversión en extremos romos del ADN termostable que se proporciona con el kit. Todas las cepas comunes de laboratorio de E.coli pueden transformarse directamente con el producto de ligado.

Características

El kit de clonado de PCR CloneJET contiene un nuevo vector de clonación de selección positiva pJET1.2/blunt listo para su uso. El vector contiene un gen enzimas de restricción letal que se interrumpe con la ligadura de un inserto de ADN en el sitio de clonación. Como resultado, solo las células bacterianas con plásmidos recombinantes pueden formar colonias. Las moléculas del vector pJET1.2/blunt que no disponen de insertos expresan una enzima de restricción letal, que mata la célula de E. coli huésped después de la transformación. Esta selección positiva acelera de forma espectacular el proceso de detección de colonias y elimina los costes adicionales necesarios para la selección azul/blanco.

Para mayor comodidad en la asignación y el manejo del inserto, el lugar de clonación con múltiples vectores pJET1.2/blunt contiene dos secuencias de reconocimiento BglII a ambos lados del lugar de inserción. Además, el vector contiene un promotor T7 para la transcripción in vitro e in vivo, así como la secuenciación del inserto.

Aspectos destacados

• Rápido: clonación rápida de PCR en solo 5 minutos
• Mayor eficiencia: > 99 % de clones positivos
• Sin fondo de clonación: vector de selección positivo
• Versátil: óptimo para la clonación de extremo romo o adherente
• Económico: sin detección azul/blanco costoso

Aplicaciones

• Clonación de extremo romo o productos de PCR de cola 3’-dA de hasta 10 kb
• Clonación de fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción
• Secuenciación de ADN clonado
•Transcripción in vitro e in vivo de insertos clonados del promotor T7

Incluye

• Vector de clonación pJET1.2/blunt
• ADN ligasa T4
• Tampón de reacción 2X
• Enzima de corte romo de ADN
• pJET1.2 primer directo de secuenciación (5'-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3')
• pJET1.2 Primer inverso de secuenciación (5'-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3')
• Producto de PCR de control
• Agua, sin nucleasas
• Protocolo detallado

Antes de la electroporación, purifique siempre la mezcla de ligación usando, por ejemplo , GeneJET PCR Purification Kit #K0701 o cloroformo para extraerlo. La presencia de proteínas y sales en la mezcla inhibe la electroporación.